禽传染性支气管炎（IB）是由冠状病毒科的传染性支气管炎病毒引起的一种急性、高度接触性传染病，以呼吸道症状、产蛋下降或肾脏病变为主要特征。其发病率可达100%，死亡率可达30%，并可使产蛋率下降20-80%。自1988年以来，IB已相继在我国大部分地区流行。该病病型复杂，常常表现为支气管炎、肾炎、输卵管炎等症状。最近，在江苏和青岛等地又分离并鉴定出了一种腺胃型的IBV毒株。本课题组王林川等（1997）[1]、黄勇等（1998）[2]、张桂云等（1997）[3]运用RT-PCR/RFLP方法分别对我国不同地区的18株分离株和8个标准株进行了分型研究，从分子水平证实了在我国流行的IBV毒株的多样性和存在不同程度的变异。由于病毒变异快，血清型多样化，给IB的防制带来很大困难，所以尽管已经研制出了一些优质的疫苗，并在生产中对IB的控制起到了积极的作用，但养鸡业的生产仍然面对着IB的巨大威胁，对IB的发生还必须加强综合防制措施。
目前，对IB的防制主要采取加强疫病监测；疫苗接种防疫；加强饲养管理和对环境的消毒，保护鸡只不受IBV的侵害；以及增强鸡只的抵抗力和中草药治疗等措施。
一、免疫监测
IBV抗体水平的监测可以为IB的防制提供重要参考依据。但是，将一般的血清型检测技术运用于免疫监测，往往规律性和准确性都比较差。常规操作中，仅靠HI滴度的高低并不能准确判断是否具有有效的保护力。保护的强弱可以从以下几个方面进行判定：呼吸器官症状、血清HI滴度、气管环纤毛活动性、气管和肾脏以及生殖器官的病毒分离等。
Mockett等（1987）[4]研究认为，用ELISA测定卵黄IBV特异性抗体可以用作反应从母体转移到子代的抗体量，并可用于判断是否对母鸡进行免疫的依据。
本课题组对IB的检测技术进行了研究，并建立了四种检测方法。王红宁等（1996）[5]在国内最先采用对流免疫电泳技术对128份人工感染鸡样品进行检测,其阳性检出率可达 81.3-83.5%。对110只免疫鸡分别于免疫7天、21天、49天、90天、180天采血进行抗体检测,其滴度在不同时间达1:2的比例为100%，该方法具有较高的敏感性和准确性,可作为有效检测IBV的方法。
刘兴友等（1997）[6]根据IBV能耐4%胰蛋白酶1h的作用，肾型IBV 的靶器官主要是肾脏，人工感染后在肾脏中检测出特异性荧光的时间最长的特点，建立了胰酶分散抗原间接荧光抗体法，该方法具有良好的特异性，检测程序简单，检测抗原的时间短，适合于制备大批量抗原用于临诊检测或抗体监测。由于该法是通过感染鸡或鸡胚的肾细胞来制备抗原，同时也为制备多价混合抗原用于不同血清型抗体检测提供了新的途径。
王乐元等（1993）[7]首次成功地建立了检测传染性支气管炎病毒（IBV）抗原的间接Dot—ELISA。对IBV抗原的最低检出量为1.36ug/ml。能检出IBV及自然感染病鸡的带毒情况，适合于大规模抗原样本的检测，可以作为疫病早期诊断的依据和进行流行病学调查。对人工感染后4天和7天的口咽拭子阳性抗原检出率在5%水平无显著差异，对本病的早期诊断有意义。
刘苹等（1997）[8]提取IBV标准强毒株M41 S1基因的重组质粒PIBV S1M41，经HindⅢ,BamHI双酶切电泳，低熔点琼脂糖回收IBV S1基因cDNA片段，用地高辛素（DIG-11-dUTP）对回收的IBV S1全基因（1.72kb)进行标记。将标记的DIG -IBV S1基因探针与已知IBV的12株病毒(包括四株标准株H52、H120、M41、T株和八株分离株SHIB、XJIB、SAIB1、SAIB2、SAIB3、SAIB4、SAIB5、D41）RNA核酸提取物进行斑点杂交反应，结果该探针与12株已知IBV毒株均成阳性反应，而与NDV、IBDV、ILTV、正常胚液、蒸馏水对照均成阴性。 该探针具有较强的群特异性，其检测灵敏度为9.77fg，杂交灵敏度为24.41pg，具有很高的敏感性。
本课题组建立和完善的以上四种新的IB检测方法，可以用作IB的诊断和监测。其中，对流免疫电泳技术和DOT-ELISA技术已提供给国家动物检疫标准委员会将补充编入IB的检疫规程。
随着IBV变异株的不断出现，生产中常常不能对疫苗毒株和流行毒株进行有效的鉴别，而使疫情得不到及时的控制，造成生产上的重大损失和疫情的扩大。同时由于IBV 的血清型众多，各血清型之间存在交叉反应，运用血清学方法难以区别疫苗毒株和流行毒株。
寡聚核酸指纹图谱分析法可以用于IBV的流行病学调查，能区分新的变异株是否由当地株突变而来。其原理是：从纯化的IBV中提取核酸，T1酶消化后，用32P标记。再将混合物先后在10%、22%聚丙烯酰胺凝胶中进行双向电泳。经放射自显影，对图谱上相应位置的斑点进行分析，病毒基因组相差越大其图谱差异也越大。该法灵敏且重复性好，可以区分同一血清型不同突变株之间的差异。但该法只有用于基因序列同源率在95%以上时才有价值。Butcher等(1990) [9]用该法对DPI毒株第10代、第100代鸡胚传代物和T株、M41株进行了分析，发现四种图谱均有差别。
刘思国等（1999）[10]利用IBV的核蛋白基因比较保守的特点，合成一段引物，应用RT-PCR对核蛋白基因进行扩增，根据疫苗株M41在核蛋白基因3‘端非编码区缺失0.2Kb基因片段，对M41株PCR产物用地高辛标记作为探针，可以区分流行株与疫苗株。
但是，对于许多由于不同毒株之间的基因重组所产生的新的变异株，不仅常规的疫苗对这些毒株没有保护，常规方法难于对其监测，即使运用一些分子生物学方法如PCR、RFLP等进行检测，也可能会得到错误的判断。所以，进一步开展深入研究建立快速、准确的监测流行毒株感染的方法已十分必要。
二、免疫接种
对于已经有IB发生的鸡场，国内外主要采用疫苗接种的方法来预防IB，所用的疫苗主要为H52、H120等M41型弱毒苗。多数学者认为应用弱毒苗比灭活苗具有更好的免疫效果，并可以采用多种途径进行接种；也有学者认为，弱毒疫苗株在鸡群中的周期性感染有毒力返强的潜在危险。实际生产中，由于IB的血清型众多，单一的疫苗只能对同型毒株产生保护作用，对异型毒株往往只能产生部分保护或不保护，所以在H52、H120等弱毒疫苗免疫后，也可能发生即使抗体水平很高却因流行毒株的感染而导致免疫失败的现象[11] [12]。对此，一般认为首先要确定本场或本地区流行株的血清型，再选用相应血清型的疫苗进行免疫。J.K.Cook等（1984）[13]，王秀清等（1993）[14]，王红宁等（1996）[15]通过系列试验研究证实体液免疫和细胞免疫在抵抗IBV感染中几乎占有同等重要的地位，认为采用弱毒疫苗H120滴鼻与多价灭活苗注射相结合是预防IB有效的方法。
建立适当的免疫程序，使用当地分离毒株研制的疫苗，或选用与流行毒株相同血清型的疫苗毒株，才可以使鸡群获得有效的保护。由于变异毒株从致弱到实际推广需要较长的时间，并且与其它弱毒株同时使用还有发生基因重组产生新的变异株的可能，王红宁等(1994) [16]，刘兴友等（1999）[17]应用主导流行株与其它毒株研制出传染性支气管炎（呼吸型、肾型）多价油乳剂灭活疫苗,经区域试验证明,能有效地预防肾型IB,显著提高肾型传染性支气管炎疫区鸡群的成活率。刘兴友等（1997）[18]研究表明，对于肾型IB疫区采取“以四价苗免疫预防为主，结合中药及消毒管理的综合防制措施”，能够有效地防止IB的发生，提高疫区鸡的成活率和蛋鸡的生产性能。
鸡群的首次免疫接种可以依据母源抗体的高低确定，一般在7-12日龄用H120弱毒疫苗饮水，但是在环境中有野毒存在时，首免可以提前到3-4日龄。免疫时间以在早晨喂料前较好。饮水免疫前应提前2小时停止供给饮水。
种鸡的免疫程序一般为早期接种弱毒疫苗，产蛋前用油乳剂灭活苗加强免疫。英国试验推荐的种鸡免疫程序是：1日龄、4周龄、8周龄用H120 弱毒苗免疫，18周龄用油乳剂灭活苗加强免疫。早期接种弱毒苗的毒力大小对于种鸡在产蛋期抗体的产生影响很大，H52由于毒力较大能干扰蛋鸡的抗体效价而不能用于首免。
刘兴友等（1999）[17]用AUST-T株和河南、北京、天津分离毒株研制四价组织灭活苗和四价油乳剂灭活苗能有效地预防肾型IB的发生，其免疫程序是：蛋鸡5日龄免疫组织灭活苗0.25ml/只，25日龄免疫灭活苗0.25 ml/只，二免75天后进行三免；肉仔鸡5日龄免疫组织灭活苗0.25 ml/只，可以保护整个生产期。免疫后，鸡群抗体最低效价维持在5log2以上即可获得100%保护。
王红宁等（1997）[19]结合目前蛋用种鸡场的病毒性疫病发生的现状，建议种鸡免疫程序如下：
1日龄，马立克氏病（南京生药厂苗双倍量,或南京苗1头份,进口苗一头份分别注射）； 7日龄，鸡传染性支气管炎[H120滴鼻，加肾型多价油苗注射（川农科研）]；
10日龄，鸡新城疫（Ⅱ系或Ⅳ滴鼻，Ⅳ系不加量）；
14日龄，鸡传染性法氏囊病（B87滴鼻）；
24日龄，鸡新城疫Ⅳ系饮水，发病严重地区同时注射一头份油苗单苗；
28日龄 ，鸡法氏囊病B87饮水，发病严重地区同时注射一头份油苗或囊苗；
32日龄，传支H120滴鼻加多价
油苗一头份注射，
40日龄左右，鸡痘剌种（根据蚊虫出现情况而定）；
42日龄，鸡新城疫（24日龄仅饮水,此次再饮水或同时注一头份油苗单苗,若24日龄已注射油苗此次可不免）；
45日龄，传染性法氏囊病，B87饮水；50-70日龄，传染性喉气管炎：若常年用活苗的鸡场,并有该病威胁可继续用活苗,若没有发病可不免，若临时免疫可用灭活苗（川农科研）；
60-75日龄，鸡新城疫，若42日龄只用Ⅳ系饮水，可在该阶断加饮Ⅳ系一次或同时注油苗一头份，若42日龄已用油苗，此次可不免；
100-140日龄， EDS单苗免1?/FONT>2次，商品蛋鸡用ND-IB（多价）二联苗加强免疫，种鸡用ND?/FONT>IBD?/FONT>IB三联苗加强免疫；
220-280日龄 种鸡加强免疫，用ND-IB（多价）-IBD三联苗。
弱毒苗可以采用点眼、滴鼻、饮水和气雾免疫等方式，油苗可作皮下注射。
由于IBV对外界的抵抗力较小，饮水免疫时要注意选用清洁的饮水（不可直接使用自来水），并使用较合适的稀释倍数。在免疫的饮水中添加适量的脱脂奶可以增加疫苗病毒的存活时间。
许多的研究证明，具有母源抗体的雏鸡能有效防止早期IBV的侵害。因此，种鸡接种的目的在于使雏鸡获得母源抗体。雏鸡免疫时，要慎重使用毒力较强的疫
苗如H52等，其原因除了H52干扰油乳剂灭活苗在产蛋期的抗体产生水平外，还有可能在免疫鸡散毒并在鸡群中毒力返强，或导致抗原漂移产生新的血清型。同时，由于IBV灭活疫苗免疫后抗体产生维持时间短，对危险鸡群要每隔4-6周进行一次加强免疫。
当IB呈暴发流行时，要采取紧急措施进行防制。除选用相应血清型的油乳剂灭活苗紧急接种外，同时接种相应的高免卵黄抗体可以有效地减少死亡。对确诊的肾型IB，还可以在饮水中加入肾肿解毒药，以加速尿酸盐的排泄缓解症状。
随着新的变异株的不断产生，现有的疫苗和免疫程序不断受到严峻的挑战，研制新型的更有效的广谱疫苗已经成为生产中的迫切需要。
联合免疫对于畜禽疫病的防制具有重要的实际意义。由于IBV与NDV之间有相互干扰作用，在应用IBV和NDV弱毒活苗的联苗方面也一直存在争议。王红宁等（1994）[20]研究证实IBV和NDV弱毒活苗有干扰作用，而将IBV和NDV分别灭活再制成二价联苗可显著消除干扰作用，并研制了IB-ND二联油乳剂灭活苗以及IB-IBD-ND三联油乳剂灭活苗等联苗。
三、预防控制措施
虽然疫苗接种是防制IB的有效手段，但采取综合防制措施对于减少或消除IB的发生十分重要。
加强饲养管理 给予优质全价饲料，并在饲料中添加适量维生素和矿物质，适当降低饲料中的蛋白含量，以增强鸡体的抵抗力。有报道证明，高能高蛋白饲料对于肾型传染性支气管炎，可以加重对肾脏的损害。
改善饲养环境 控制饲养密度，防止鸡群因过分拥挤导致卫生状况恶化，使鸡群的整体抗病能力下降。本病主要通过空气传播，经呼吸道感染，也可通过污染的饲料、饮水、用具等经消化道感染，新近的研究还发现IBV还可以经过泄殖腔感染，这就要求搞好鸡场的环境卫生切断传播途径。
尽可能减少各种应激因素,如温度、水、电、通风换气等保持正常稳定。其是在冬季，既要加强鸡舍内的空气流通，防止有害气体的滞留，使鸡舍空气中氨的含量不超过5ppm，硫化氢的含量不超过1ppm，二氧化碳的含量不超过0.2%；同时又要保持鸡舍内具有适度的温度和湿度。
健全消毒制度 执行严格的消毒措施，坚持作好预防性消毒，保护鸡群不受IBV的感染。种蛋要用甲醛熏蒸两次以后才能入孵。鸡舍可用2%甲醛或氢氧化钠溶液进行消毒。IBV对常规的消毒药如新洁而灭、百毒杀等均很敏感。
对鸡只实行全进全出，空场不少于14天，并对全场进行彻底清洗、消毒。进雏后，定期进行带鸡消毒，以减少病原微生物和尘埃的污染，尽可能地减少呼吸道疾病的发生，减少和控制继发感染和合并感染。
四、IB的治疗
目前，还没有特别有效的药物可以用于IB的临床治疗。对发病鸡群要注意保暖、通风换气和带鸡消毒，适当增加多维用量。使用抗生素可以控制继发感染。
将中草药制剂肾肿解毒药溶于饮水或滴服，可以加速尿酸盐的排泄并阻止其进一步生成，从而缓解症状减少鸡只的死亡。给予复方口服补液盐或碳酸氢盐，可以补充钾、钠的损失和消除肾脏炎症。
汪德刚等（2000）[21]运用中草药制剂肾支灵治疗鸡肾型IB，取得了良好的效果。并初步分析中药肾支灵主要是通过改善和消除症状和病理损害而产生治疗作用。
总之，由于IBV易发生变异，而许多新的变异株流行时间短、涉及范围小，所以疫情的监测就显得十分必要。根据IB的防制规律，疫苗的研制应重点针对那些持续存在，并在生产中造成重大经济损失的变异株。同时，在生产上还要避免盲目将不同血清型的IB弱毒疫苗混合使用，以减少新的变异株的出现，防止疫情的复杂化。对于无IB发生的鸡场要积极防范，采取严格的综合性防制措施，禁止从疫区或不安全的种鸡场引种，严防本病的传入。对有IB发生的鸡场，要严密监测疫病的发展动态，及时处理病死鸡，作好鸡群的隔离和随时消毒，并辅于适当的药物治疗。对IB的预防，要根据当地的生产实际和IB以及其它疫病流行的情况综合制定科学的免疫程序，作好疫情的监测，并根据免疫的实际效果和变异毒株的出现适时调整。
|
